Иммуногистохимическое исследование (игх)

Роль иммуногистохимии в определении “прогностических” и “предиктивных” факторов при раке молочной железы

Прогностические факторы предоставляют информацию о возможном поведении рака молочной железы на момент его диагностики и не зависят от терапии. То есть с помощью них можно судить, как будет быстро прогрессировать рак и, соответственно, в зависимости от этого принять решение, какой объем и лечение предпочтительны в каждой конкретной ситуации.

В свою очередь, “предиктивные” (предсказывающие) факторы обеспечивают информацией, которая позволяет судить о вероятности ответа опухоли на конкретную терапию. Несмотря на то, что прогностические и предиктивные факторы возможно систематизировать по отдельности, в диагностике и классификации рака молочной железы чаще они являются как прогностическими, так и предиктивными.

Например, наличие высокой экспрессии HER2. Если рак молочной железы her2 положительный (большое количество в опухоли белка HER2), то он протекает агрессивно, с ранним метастазированием в отдаленные органы. А если опухоль содержит малое количество этого белка (рак молочной железы her2 негативный), она не будет реагировать на применение таргетного препарата герцептина.

Рекомендуем прочесть статью о том, что такое люминальный рак молочной железы. Из нее вы можете узнать, как современные методы исследования помогают определить подтипы рака, как выбирают оптимальный метод лечения рака молочной железы в зависимости от результатов исследования.

“Базальные” ИГХ маркеры

Существует подразделение рака молочной железы в зависимости то того, какие гены экспрессируют его клетки (профиль экспрессии генов). Опухоли, профиль которых характерен для базальных или миоэпителиальных клеток нормальной молочной железы, будут показывать наличие «базальных» маркеров. Такие опухоли имеют неблагоприятный прогноз. В большинстве из этих «базальных» опухолей полностью отсутствуют ER, PR (рецепторы к эстрогену и прогестерону) и белок HER2. Они часто метастазируют в головной мозг, в легкие.

На сегодня нет консенсуса по иммуногистохимическому профилю (какие ИГХ маркеры должны применяться), который бы четко определял эти «базальные» раки. К этим опухолям с плохим прогнозом относится и так называемый «трижды негативный рак молочной железы», в котором отсутствуют ER, PR и HER2, но экспрессируются базальные цитокератины 5/6 и 14, рецептор эпидермального фактора роста (EGFR) и C-KIT. Они могут также экспрессировать P-кадгерин и часто p63.

Есть сходство между «базальным» раком молочной железы и раками, которые выявляются у женщин с BRCA1 мутацией.

EGFR экспрессируется часто в «базальных» раках, поэтому пациентки с такими опухолями могут извлечь пользу при лечении ингибиторами EGFR.

ИГХ маркеры пролиферации (скорости роста опухоли)

Количество митозов или процент клеток, находящихся в митозе, давно считается морфологическим «биомаркером» прогноза рака. Существует ряд ИГХ маркеров, которые демонстрируют пролиферативную активность клеток (количество митозов):

• Ki67 — антиген, который экспрессируется в ядрах клеток на всех этапах клеточного цикла и является полезным маркером клеточной пролиферации;
• MIB1 — антитело, которое реагирует с Ki-67 в ткани, зафиксированной формалином или парафином;
• PPh3.

ИГХ маркеры апоптоза

Апоптоз или «запрограммированный суицид клетки» является биомаркером агрессивных опухолей. Белки апоптоза можно идентифицировать с помощью ИГХ:

• Bcl-2;
• Вах;
• Bcl-X.

Другие “прогностические” маркеры

• р53. Мутации в гене р53 супрессора опухолей (TP53) выявляются в 20-30% случаях рака молочной железы. Эти генные мутации наблюдаются чаще у женщин с наследственными синдромами рака молочной железы, чем у женщин с спорадическим раком. Для пациентки с генетической предрасположенностью к раку молочной железы может быть рекомендовано р53-тестирование. Обнаружение мутаций в р53 также рассматривается в качестве возможного предсказателя ответа рака молочной железы на химиотерапию, но обнаружение белка р53 иммуногистохимически в опухоли не отражает статус мутации р53.
• Топоизомераза II альфа. Это мишень, на которую направлено действие антрациклина — химиотерапевтического препарата, который часто используется в лечение рака молочной железы.

Особенности и значение диагностического метода

Иммуногистохимия – высокоточное микроскопическое тестирование взятого биоматериала, помогающее специалистам обнаружить и провести идентификацию особых веществ, характерных для раковых клеток.

На сегодняшний день гистохимия используется с целью:

1. Уточнения предполагаемого диагноза.
2. Установления вида или подвида опухоли.
3. Определения стадии злокачественного процесса.
4. Выявления степени распространенности единичного ракового новообразования.
5. Установления патологического очага, провоцирующего метастазы, если исследуемый образец получен из вторичного злокачественного источника.
6. Определения особенности ответной реакции на лечение.
7. Подтверждения результатов предыдущих анализов.
8. Исключения вероятного присутствия других злокачественных процессов.
9. Уточнения скорости роста опухоли.

Основная суть иммуногистохимической диагностики состоит в следующем:

• Изучение клеток биоптата злокачественного новообразования с применением реактивов, содержащих особые белки (или антитела), помеченные специальными веществами, поддающимися детектированию.
• Иммуноглобулины обладают пространственным строением, которое разрешает им соединяться с отыскиваемым веществом (антигеном) в онкологических клетках. Подобный химический процесс называется «антиген-антитело», позволяющий подтвердить присутствие в исследуемом материале веществ, характерных для рака.

Способы проведения

Гистохимическая методика исследования полученного образца тканей груди может проводиться двумя способами:

Стоит подчеркнуть, назначаемые медикаментозные средства для лечения онкологии должны получить подтверждение ИХГ.

Стоимость процедуры

Сколько стоит выполнение ИХГ молочной железы? В большинстве регионов РФ при наличии направления специалиста данный тест можно сделать бесплатно. Однако в случае обращения пациентки в коммерческие лаборатории, представляющие платные услуги, цена анализа зависит от применяемого количества антител.

В основном при проведении исследования используется от двух до пяти антител, но могут выявляться около десятка антигенов. Исходя из этого, и определяется стоимость процедуры:

• От 2 до 5 антител – 4000-5000 рублей.
• До 10 антител – от 15000 рублей.

Иммуногистохимическое исследование

Иммуногистохимические исследования или иммуногистохимия (сокращенно ИГХ) — это анализ, который применяется для диагностики различных заболеваний и нашел особенно широкое применение в онкологии. С помощью него обнаруживают маркеры — вещества (белки),которые в больших количествах вырабатываются опухолевыми клетками. Это помогает врачам решать различные диагностические задачи.

Суть исследования ИГХ в том, что к образцу опухолевой ткани добавляют антитела, которые распознают искомое вещество как антиген и связываются с ним. Благодаря этому соответствующие участки опухолевой ткани окрашиваются, и их можно обнаружить при исследовании под микроскопом.

Иммуногистохимическое исследование слизистой оболочки желудка на Helicobacter pylori

Грамотрицательная бактерия, имеющая спиралевидное тело длиной всего лишь 3 мкм, которая попадая в организм человека из естественных водоемов, обитает в нижнем отделе желудка, носит название Helicobacter pylori. Она способна спровоцировать развитие серьезных поражений слизистой кишечника и желудка. Диагностика хеликобактериоза остается очень актуальным вопросом для назначения эффективного лечения таких заболеваний.Существует несколько методов для диагностики Helicobacter pylori в слизистой желудка: гистологический, культуральный и уреазный. Также используется ПЦР диагностика инфекции Helicobacter pylori. Самым надежным является гистологический метод — точность почти 95%. Одна из разновидностей гистологического метода — иммуногистохимический анализ. Это метод очень хорош даже при малом осеменении слизистой желудка бактерией. Его суть заключается в следующем: биопсионный материал обрабатывают специальными моно — колониальными к хеликобактерии антителами.Исследование широко используется в диагностике:

• язвенных повреждений слизистой желудка и кишечника;
• гастритов;
• дуоденита;
• рака желудка;
• лимфомы желудка.

Когда назначается исследование

Иммуногистохимическое исследование дает представление о возбудителе инфекции. Чаще всего, инфицирование случается бытовым путем — через слюну и слизь зараженного человека. Попадая в новый организм, бактерии «зарываются» в слизистую желудка, нарушают ее структуру, что приводит к неполноценному функционированию.Опытный специалист — гастроэнтеролог, хирург, онколог назначит исследование на хеликобактериоз при таких симптомах желудочного недомогания как:

• дискомфорт в желудке перед едой;
• острые повторяющиеся боли в эпигастрии;
• ощущение тяжести в желудке;
• изжога;
• отвращение от мяса.

Как подготовиться к иммуногистохимическому исследованию

Биоматериал для исследования получают из патологически аномального очага, взятие проводится лечащим врачом пациента. Взятый объект помещается в контейнер с 10% формалином и доставляется в лабораторию; там из образца готовят препараты, которые окрашивают и микро — скопируют.

Процедуру проводят утром, строго натощак, допускается питье воды в небольших количествах.

Для того, чтобы анализ дал точный результат, пациенты должны знать правила поведения до этой процедуры:

• обследование проводится до начала приема антибактериальных препаратов;
• за три дня до анализа нужно прекратить прием медикаментов, разжижающих кровь; отказаться от острой пищи, спиртных напитков, кофе;
• ужинать накануне нужно не позднее 20 часов;
• перед процедурой можно пополоскать горло раствором антисептика — это снизит чувствительность во время введения зонда.

Что означают результаты исследования

В ответе анализа указывается качественный результат «обнаружена» хеликобактерия или «не обнаружена».
В норме — Helicobacter pylori не выявляется.Количественный результат зависит от степени выраженности поражения, она обозначается:

• «+» — малая степень наличия возбудителя
• «++» — средняя
• «+++» — высокая
• «-» — означает отсутствие хелиобактериоза.

На результаты анализа могут повлиять нарушения, допущенные при заборе, фиксировании и доставке биоматериала в лабораторию.Очень важно:

• тщательно закрывать емкость с образцом — не допустить высыхания фиксатора и ткани биоматериала;
• материал в виде сгустка крови, слизи не может расцениваться как полноценный образец для исследования;
• запрещено делить полученный образец и отправлять его в разные лаборатории, это приводит к разным результатам исследования.

Что это за исследование, стоимость

ИГХ исследование – это диагностический метод, который направлен на выявление точной локализации опухолевого компонента (антигена), благодаря его связыванию с антителами. На данный момент иммуногистохимический анализ широко применяется в лечебных учреждениях онкологического профиля.

Благодаря широкому внедрению этого метода исследования, патологи смогли с точностью понимать, какой вид опухоли они рассматривают.

Этот метод представляет собой уточняющий вариант диагностики и служит для более точной постановки диагноза. Он позволяет дифференцировать опухолевый процесс и более точно определять, к какому виду опухоль относится. Но нужно отметить, что этот диагностический метод применяется не только в онкологии, но также он широко применяется в инфекционных болезнях.

Механизм диагностики состоит в том, что клетки несут в себе множество разных рецепторов. Когда клетки начинает приобретать новые для себя свойства, видоизменяться, они выделяет определённые рецепторы. Благодаря иммуноцитохимии, можно распознать молекулярный рецептор структуры клетки. Метод построен на реакции «антиген – антитело».

Антиген – это вещество, которое содержит белок. Он, в свою очередь, является составной частью клеток человеческого организма. И может содержаться как в здоровых клетках, так и быть одной из частей «атипичных» клеток и инфекционных агентов.

Антитело – это вещество, которое вырабатывается иммунной системой организма в ответ на обнаружение антигена.

Если назвать суть исследования простым языком, то этот анализ представляет собой лабораторную модель иммунной реакции, происходящую в организме человека.

С помощью ИГХ – исследования можно выявить:

• Инфекционные агенты (в особенности вирусы).
• Определённые рецепторы клетки (которые появляются в процессе её изменения).
• Клеточные продукты (иммуноглобулины, гормоны и ферменты).

Цены на иммуногистохимическое исследование варьируются в зависимости от региона, где пациент хочет его сделать. В среднем стоимость ИГХ исследования составляет около 10 тыс. руб. А также стоимость зависит от показаний для проведения исследования.

ИГХ исследование – это диагностический метод, который также можно сдать бесплатно по полису ОМС (обязательное медицинское страхование). Но для этого пациент должен находиться на стационарном лечении в отделении онкологического профиля. Диагностику также можно провести в частных лабораториях или в крупных онкологических центрах.

Проведение исследования

Проводится трепанобиопсия путем забора кусочка ткани из места предполагаемой опухоли. На груди у женщины маркером отмечается черная точка. Если была проведена операция, то иссеченный материал также подходит для изучения. Затем ткань проходит следующие этапы:

• отправляется в лабораторию;
• помещается в емкость с формалином;
• обезжиривается;
• заливается жидким парафином для получения блоков с целью изучения на гистологию;
• с блоков делаются срезы толщиной в 1 мм, помещаются на специальные стекла;
• срезы окрашивают препаратами или антителами для иммуногистохимии;
• через 10-12 дней лаборанты интерпретируют результаты.

Исход благоприятен после терапии гормональными препаратами, если Ki-67 в анализе, как показатель на онкогенность, не превышает 15-17%. Если доходит до 35% в составе ткани, то опухоль имеет стремительное развитие. В данном случае приостановить ее можно только химиопрепаратами. При превышении показателя Ki-67 в 85-95% летальный исход вероятен практически в каждом случае.

Статус рака – HER2

Именно рецепторы HER2, лежащие на поверхности клеток, являются некими “антеннами” для улавливания химических сигналов или команд, отдаваемых организмом клеткам. Рецепторы должны быть в норме, а клетки молочной железы – своевременно делиться и восстанавливаться.

У многих женщин так называемый ген HER2 начинает давать сбой, вырабатывая множество рецепторов. Клетка, получая опасный сигнал, начинает быстрее делиться и размножается уже бесконтрольно. Когда врачи утверждают, что иммуногистохимическое исследование указывает на статус HER2, это значит следующее: диагностирован рак молочной железы, его начальная стадия.

У каждой женщины при подозрении на рак определяется статус опухоли. Для чего это нужно? Конечно же, для назначения правильной терапии. Статус постепенно может трансформироваться из положительного в отрицательный. Иммуногистохимия выявляет степень онкогенных клеток в забранной патологической ткани. При раке же и карциноме молочной железы рецептор или белок превышает свое процентное содержание. Клетки становятся неуправляемыми и начинают неконтролируемо делиться, расти.

Расшифровка анализа

Исследуется структура взятой ткани, количество атипичных антител, по которым и будет определен вид рака.

Интерпретация или расшифровка анализа проводится онкологом, который и должен донести до пациента всю полученную информацию. В результате (на бланке анализа) обязательно прописываются показатели Ki 67, указывающие на степень озлокачествления опухоли. Кроме того, обследуется гормональный фон женщины, от которого напрямую зависит поведение новообразования, степень его прогрессирования и скорость появления метастазов.

Иммуногистохимическое обследование диагностирует стадию, форму и степень развития онкологии, после чего и будет подобрано самое оптимальное лечение. Если гормональный фон в норме, но опухоль неактивна, лечение может ограничиться назначением пациенткам гормональных препаратов. При излишней активности опухоли, то есть при повышении показателей Ki 67, уже не обойтись без назначения более тяжелых химических средств.

Клетки в здоровом организме должны самостоятельно восстанавливаться и нормально делиться. Значит, при позитивном HER2 рак будет прогрессировать, а опухоль станет быстро увеличиваться в размерах. Для подавления стимуляции роста новообразования при положительном HER2 лечение назначается медикаментозное (Герцептин, Лапатаниб). Если HER2 отрицательный или негативный, то лечение иное – с назначением более действенных химиопрепаратов.

ИГХ считается сложным и многоступенчатым методом. Используется много маркеров, и расшифровать результаты иммуногистологических анализов правильно под силу лишь специалистам. Обычно при выявлении онкологии у женщин собирается целый консилиум врачей, чтобы более адекватно распланировать и выбрать всю последующую тактику лечения.

ИГХ важен для врачей с целью выбора правильной тактики при назначении лечения, для дачи прогнозов на будущее

Что такое иммуногистохимия?

Иммуногистохимия

Раковые клетки производят определенные белки, у которых есть связь с антителами. ИГХ позволяет изучить взаимодействие между ними. Во время исследования используются стандартные антитела. Учитывая определенные изменения при взаимодействии клеток, медики определяют структуру и форму злокачественного новообразования.

Опухоль для человеческого организма является чужеродной. Во время борьбы с ней в теле пациента вырабатываются антитела. Иммуногистохимия помогает обнаружить раковые клетки, определяет их структуру и строение.

Для врачей подобное исследование важно тем, что по результатам они подбирают максимально эффективное лечение пациентам. При помощи ИГХ можно определить:

• развитие опухолей;
• рецепторы стероидных гормонов;
• образование злокачественной опухоли, если первичные признаки очага отсутствуют;
• формирование новообразования без классификации;
• количество мембранного белка (HER2) в клетках молочной железы.

Результатами исследования занимается специалист онколог

Важно определить количество гормональных рецепторов в молочных железах. Чем больше показатели, тем опухоль спокойнее и медленнее растет

У пациента высокие шансы, чтобы полностью избавиться от рака на ранней стадии развития.

Гормональная терапия в таких ситуациях позволяет добиться положительного исхода на 80%.

Применение в онкологии

При обнаружении онкологических заболеваний метод иммуногистохимического анализа

1. Гистогенетическая диагностика опухолей (проведение биопсии).
2. Определяет тип новообразования.
3. Выявляет метастазы и первичную опухоль.
4. Определяет прогноз развития заболевания.
5. Злокачественная трансформация клеток.
6. Возможность применения таргетной терапии.
7. Резистентность и чувствительность опухолевых клеток к химическим препаратам и лучевой терапии.

Метод иммуногистохимического анализа для определения первичных опухолей и метастаз использует большое количество различных маркеров, что позволяет наиболее точно диагностировать заболевание и ход его развития. На основе ИГХ-анализа врач онколог получает заключение с положительными и отрицательными маркерами. Поэтому, иммуногистохимический анализ помогает подтвердить или опровергнуть гипотезу других клинико-лабораторных исследований.

Для патологоанатома ИХГ-анализ позволяет выявить причинно-следственную связь.

Рис. 3. Иммуногистохимический анализ виментин+положительных новообразований. Гистологическое исследование

Этапы диагностики

Диагностика ИГХ подразумевает выполнение биопсии матки (выскабливание слизистых детородного органа), поэтому проводят ее в тот период, когда эндометрий готов к таким манипуляциям. Врач назначает определенную дату для сдачи анализов

Крайне важно, чтобы процедура была выполнена именно в этот день

Как правило, ИГХ назначают на 5–7-й день цикла при необходимости выявления воспалений, миомы, полипов и патологического разрастания эндометрия. При оценке рецепторной функции проведение исследования рекомендуется на 20–24-е сутки.

В процессе подготовки к процедуре нужно придерживаться следующих рекомендаций:

• в течение семи дней до исследования не принимать гормональные медикаментозные средства;
• во избежание кровотечения не прибегать к использованию препаратов, способствующих разжижжению крови;
• в день проведения иммуногистохимического исследования эндометрия строго соблюдать все правила интимной гигиены.

Диагностика проводится в несколько этапов:

1. Прежде всего вводят обезболивающее.
2. Производят установку специальных расширителей.
3. Обрабатывают ткани антисептическим средством.
4. Вводят специальный прибор – гистероскоп.
5. Выполняют выскабливание слизистых.
6. Извлекают аппарат.
7. Поврежденные сосуды сразу прижигают.
8. Полностью извлекают оборудование.
9. Повторно сканируют все исследуемые органы.
10. Убирают расширители.

Когда все диагностические мероприятия выполнены, женщину отправляют в палату, где ей нужно оставаться до тех пор, пока действие анестезии не закончится. Сразу после этого можно будет покинуть медицинское учреждение. Результаты будут готовы спустя несколько суток.

Категории

АллергологАнестезиолог-реаниматологВенерологГастроэнтерологГематологГенетикГепатологГинекологГомеопатДерматологДетский гастроэнтерологДетский гинекологДетский дерматологДетский инфекционистДетский кардиологДетский лорДетский неврологДетский нефрологДетский офтальмологДетский психологДетский пульмонологДетский ревматологДетский урологДетский хирургДетский эндокринологДиетологИммунологИнфекционистКардиологКлинический психологКосметологЛогопедЛорМаммологМедицинский юристНаркологНевропатологНейрохирургНефрологНутрициологОнкологОнкоурологОртопед-травматологОфтальмологПаразитологПедиатрПластический хирургПроктологПсихиатрПсихологПульмонологРевматологРентгенологРепродуктологСексолог-АндрологСтоматологТерапевтТрихологУрологФармацевтФизиотерапевтФитотерапевтФлебологФтизиатрХирургЭндокринолог

Применение метода в диагностике

Показания к анализу:

• Патологии репродуктивной системы, бесплодие;
• Активный опухолевый рост любой локализации.

Противопоказаний к анализу нет. Порой невозможно получить биоматериал для исследования из-за расположения опухоли.

Иммуногистохимия эндометрия – важное исследование для нахождения причин бесплодия. Его цель – найти антиспермальные клетки, препятствующие оплодотворению

Причиной бесплодия становится нечувствительность эндометрия к гормонам во время овуляции. При этом показатели гормонального фона в норме, антиспермальных тел нет. Иммуногистохимическая диагностика выявляет, что проблема в рецепторах эндометрия.

Трудно поддаются диагностике тимомы. Их деление на злокачественные и доброкачественные условно. Всё зависит от конкретного случая. Статус опухоли вилочковой железы, тимуса показывает исследование на антитела.

ИГХ при раке прямой кишки применяется, чтобы установить эпителиальный или эндокринный характер опухоли, наследственный фактор и прогноз. Методика определяет первичное ли заболевание и метастазы.