Диагностика методом пцр: современный подход выявления инфекционных и генетических заболеваний

Показания к ПЦР

ПЦР на половые инфекции выполняются пациентам, которые:

• жалуются на симптомы со стороны урогенитального тракта;
• вступали в половые контакты с потенциальным или установленным источником венерических инфекций;
• желают обследоваться с профилактической целью (для раннего выявления и лечения венерических заболеваний до возникновения осложнений);
• обследуются по поводу бесплодия;
• планируют лечение бесплодия, в частности с использованием вспомогательных репродуктивных технологий;
• планируют операции на репродуктивных органах (все венерические болезни должны быть выявлены и пролечены для снижения риска инфекционных осложнений).

Как мы уже выяснили, ПЦР выполняется не только для первичной диагностики.

Поэтому показаниями для получения результатов этого исследования также являются:

• прохождение курса терапии по поводу венерического заболевания;
• ВИЧ-позитивный статус (исследования проводятся регулярно для оценки последствий заболевания, особенностей его течения, назначения и коррекции антиретровирусной терапии);
• наличие папиллом на половых органах (для оценки риска рака);
• выявление ЗППП другими методами, например с помощью микроскопии или бак посева (показано обследование методом ПЦР на сопутствующие инфекции).

Нередко ПЦР делают пациентам в случае неудач в лечении тех или иных заболеваний.

Например, если терапия кандидоза не приносит успеха, необходимо исследование для определения вида грибка.

Исходя из этой информации, врач сможет подобрать более эффективную схему медикаментозной терапии.

Процесс сбора анализов

Но не только больной обязан соблюдать необходимые условия. То же относится и к врачам. Чтобы забор анализов на туберкулез был проведен правильно, нужно делать это только в стерильных условиях, иначе в жидкую среду могут попасть другие микроорганизмы, следовательно, интерпретация будет неверной. Все инструменты, приборы и контейнеры тоже должны быть в стерильном виде.

Итак, материал собирается в специальные контейнеры, которые при необходимости специалист дает пациенту. Например, моча собирается только первая после пробуждения человека утром. Но при этом необходимо провести утренние водные процедуры в соответствующих местах. Мочи для сбора достаточно от 20 до 30 мл. А вот синовиальную жидкость из спинного мозга и прочие сложные анализы берет только высококвалифицированный специалист, находящийся в стационарных условиях.

У женской половины человечества мазок берет только гинеколог на специализированном кресле, а у мужчин соскоб или мазок забирается из мочеиспускательного канала (из наружной части). Из зева мазок берет врач специальной лопаткой или другими инструментами. Кровь берется непосредственно из вены стерильными шприцами.

На последнем этапе сбора доктор с учетом всех требований транспортировки и хранения направляет образец в специальную лабораторию для дальнейшего исследования. Для этого персонал лаборатории помещает кровь или прочие мазки в пробирку, в которую заблаговременно добавлено вещество, препятствующее преждевременному старению образца.

В случае с кровью, что особенно важно, данное вещество не позволяет ей свернуться, следовательно, наличие сгустков исключено. Пробирки при этом не встряхиваются, так как можно повредить состояние эритроцитов. Это все нужно для того, чтобы легче и быстрее было определить все компоненты крови

Это все нужно для того, чтобы легче и быстрее было определить все компоненты крови.

Потом кровь на туберкулез центрифугируют, чем отделяют от плазмы клеточный осадок, который и изучается под микроскопом. Изучив первоначальные данные, добавляют фермент (транскриптазу) и при определенном температурном режиме проводят следующую цепную реакцию. Благодаря этому образуются фрагменты генетического материала, которые и подвергаются расшифровке.

Как расшифровываются результаты

Не всегда анализ бывает правдивым. Ложноположительный результат бывает только в том случае, если не соблюдены все требования по подготовке и сдаче мазков и т.д. Именно поэтому следует как пациенту, так и врачам строго придерживаться всех правил, о которых говорилось выше.

Расшифровка может быть как простой, так и сложной. К первой относится определение «отрицательно» или «положительно», что свидетельствует о том, что при отрицательной расшифровке пациенту не о чем беспокоиться, т.к. инфекций не обнаружено.

При положительных результатах простой формы количество содержащихся возбудителей является ничтожно малым. Дело в том, что в медицине существуют определенные нормы, благодаря которым можно определить степень устойчивости к заболеваниям.

ПЦР на туберкулез необходимо сдать всем, кто хочет знать нюансы своего состояния при данном недуге. Для изъятия посева при подозрении на туберкулезную форму поражения легких оптимальным вариантом будет использовать то, что является содержимым желудка (это определяет такие показатели, как иммуноглобулин, СОЭ, микобактерии и лейкоциты). Кроме того, для подтверждения полученного диагноза или при подозрении на туберкулез, может использоваться томография, проба Манту, ИФА.

ПЦР рекомендуется проводить в утреннее время. Это настоятельно рекомендуется проводить до того, как содержимое области желудка опустошится от всего массива мокроты, которая была проглочена за ночь (последний проведенный День борьбы с туберкулезом регламентировал это). В связи с этим, ПЦР на наличие туберкулеза необходимы, как и томография, ИФА и Манту. Они позволяют выявлять микобактерии и состояние мочи, СОЭ, общий иммуноглобулин и определять актуальное состояние легких.

Следует отметить, что анализ на туберкулез должен осуществляться при соблюдении дополнительных норм и учете некоторых нюансов:

• посев осуществляется в течение трех раз, однако аспирацию всего, что находится в желудке, необходимо осуществлять в условиях стационара;
• посев наличествующих масс в желудке выявляет микобактерии менее чем в 50% диагнозов, даже при самых оптимальных условиях – вместо них рекомендовано УЗИ;
• результат отрицательного характера не может исключать вероятности развития туберкулеза, при котором изменяется СОЭ, иммуноглобулин и другие показатели;
• еще менее восприимчив посев материалов при ПЦР на патологическое состояние, полученного в рамках бронхоскопического обследования, исключающий подозрения на .

Что такое ПЦР

Техника проведения полимеразной цепной реакции известна достаточно давно и успешно используется для диагностирования ряда вирусных заболеваний, и HCV не является исключением.

В настоящее время существует несколько методик постановки ПЦР, но в принципиальном плане этот процесс состоит из нескольких этапов:

1. Разрушение двойной нити ДНК под воздействием нагревания либо определенных химических веществ.
2. Присоединение к разделенным основанием ДНК так называемых праймеров – остатков нуклеотидной цепи РНК вируса (в большинстве современных тест-систем используются 5`-NTR-области генома HCV).
3. Специфический фермент, ДНК-полимераза, распознает праймер, провоцирует присоединение других нуклеотидных остатков.

По окончании третьего этапа полимеразной цепной реакции ДНК между двумя праймерами удваивается, а впоследствии происходит амплификация участка генома в геометрической прогрессии (2–4–8 и т.д.).

Чувствительность современных тест систем составляет 10–50 копий РНК в 1 мл крови.

Расшифровка ПЦР на гепатит С должна проводиться квалифицированным специалистом. В соответствии с Международным стандартом ВОЗ для количественного определения вирусного генома служит образец плазмы крови в лиофилизированном виде, содержащий РНК первого генотипа вируса в концентрации 105 МЕ/мл.

При этом обращают внимание на количественные единицы, в которых выражены результаты исследований. Обычно количество копий РНК HCV указывают в абсолютном или логарифмическом выражении

Затем, в соответствии с международными стандартами, эту цифру пересчитывают при помощи специального коэффициента в международные единицы (МЕ). Таким образом конечные результаты обозначаются в МЕ/мл.

Для проведения количественного исследования применяют различные тест-системы и методики постановки полимеразной цепной реакции. Некоторые предназначены для оценки уровня виремии в плазме или сыворотке. Другие более эффективны и показательны при исследовании цельной крови.

Говорить о норме при интерпретации указанных в лабораторном бланке результатов не совсем корректно. Дело в том, что у здорового человека РНК вируса в организме отсутствует, а наличие частиц HCV вне зависимости от количественного показателя свидетельствует об инфицировании. В дальнейшем при помощи ПЦР оценивают эффективность лечения. При отрицательном результате на 4 неделе приема медикаментов, а затем и после окончания противовирусной терапии (на протяжении 48 недель) говорят о выздоровлении.

Виды исследования

Проведение полимеразной цепной реакции предполагает определение не только наличия РНК HCV в крови, но и определение количества копий вируса и анализ структуры генома. Такие возможности делают ПЦР одним из наиболее информативных и точных методов диагностики вирусного гепатита C.

Все применяемые на практике методы постановки полимеразной цепной реакции приведены ниже в порядке проведения (каждый последующий тест назначают при положительном результате предыдущего):

1. Анализ ПЦР на гепатит С качественный, проводится только для обнаружения РНК вируса в крови.
2. Количественное исследование ПЦР. Расшифровка проводится согласно общепринятым нормам. В зависимости от результата вирусологическая нагрузка может быть низкой, умеренной или высокой. Данный показатель является одним из предикторов исхода терапии HCV.
3. Генотипирование (во многих частных лабораториях предлагается в комплексе с количественным анализом, что снижает общую стоимость). Обозначение генотипа HCV осуществляется одной из арабских цифр (с 1 по 6). На территории России чаще выявляют генотип 1 или 3, несколько реже – 2, 4–6 диагностируют в единичных случаях. Ранее при использовании интерфероновых схем лечения разновидность HCV определяла длительность и эффективность терапии. Современные противовирусные средства отличаются широким спектром действия, но некоторые из них прописывают только при 1–4 генотипах HCV.

Генотипирование проводится только один раз, перед началом терапии. По мере приема медикаментов количественные нормы гепатита С необходимы врачу для оценки эффективности противовирусных препаратов. После окончания курса лечения проводят качественное исследование ПЦР.

Анализ методом ПЦР

ПЦР анализ — что это такое? Это метод использует принципы молекулярной биологии. Для исследования материала применяются особые ферменты, которые многократно и быстро копируют ДНК, РНК фрагменты возбудителей болезни. Существует разные виды ПЦР анализа в зависимости от исследуемого материала (кровь, моча, кал и т.д.). После обработки сотрудники лаборатории сравнивают с базой данных полученный результат, выявляют концентрацию, тип возбудителя.

Анализ на ПЦР помещают в специальный амплификатор (прибор), который нагревает и охлаждает пробирки с биоматериалом. Изменения температуры нужны для репликации фрагментов. Точность результата будет зависеть от точности температурного режима. Метод полимеразной цепной реакции помогает выявить:

• инфекционный мононуклеоз;
• ВИЧ;
• цитомегаловирусную инфекцию;
• вирусные гепатиты G, C, B, A;
• инфекции/заболевания, передающиеся половым путем (ИППП/ЗППП): гарднереллез, трихомониаз, уреаплазмоз;
• герпетическую инфекцию;
• онкогенные вирусы;
• листериоз;
• хеликобактерную инфекцию;
• клещевой энцефалит, боррелиоз;
• туберкулез;
• кандидоз.

Крови

На данный момент из-за новизны технологии анализ крови методом ПЦР все еще имеет высокую цену. Для подготовки биоматериала не нужно соблюдать определенные требования. Даже вызванные физическими нагрузками, стрессами, сменой рациона питания изменения состава не влияют на результат исследования. ПЦР анализ крови может испортить только прием антибактериальных средств, поэтому перед сдачей необходимо выдержать паузу между лечением и тестом.

ПЦР исследование крови – самый распространенный вариант диагностики хронических, острых инфекционных патологий при вирусном или атипичном проявлении. Серологические методы исследования имеют определенную трудность при проведении – определение наличия возбудителя проводится по наличию антител в организме человека. Результат мог быть ложноотрицательным, если состояние больного не давало время для их выработки.

Мазка

В сфере гинекологии для исследования наличия инфекционных микроорганизмов используют ПЦР анализ мазка. Работа с материалом проводится по тому же принципу, что и с кровью: многократное увеличение фрагментов ДНК возбудителя, чтобы с легкостью его идентифицировать. Это же помогает обнаружить скрытые инфекции у женщины. Для проведения анализа могут быть взяты разные биологические жидкости: слюна, мокрота, моча, кровь. В гинекологии для точности определения чаще используется мазок со слизистой влагалища из цервикального канала.

Для проведения ПЦР существуют определенные показания. Нередко его нужно сделать, чтобы выявить устойчивый к антибиотикам вид возбудителя. У женщин основными показаниями для диагностики по этому методу выступают:

• беременность, которая протекает тяжело;
• острая фаза ИППП;
• если есть подозрение на переход ИППП в хроническую стадию;
• поиск причин бесплодия.

Кала­

Для выявления инфекции может быть назначен со стороны врача анализ кала на ПЦР. Для того, чтобы получить максимально достоверные результаты после теста, необходимо придерживаться следующих правил перед забором биоматериала:

• за несколько суток прекратить прием слабительных препаратов: масла, свечи;
• исключить медикаменты, которые дают специфическую окраску калу, к примеру, с содержанием железа.

Для забора следует использовать стерильную палочку и контейнер. Чем-либо их дополнительно протирать, ополаскивать не нужно. При сборе материала будьте осторожны, вы не должны задеть рукой внутренние стенки контейнера. Следите, чтобы в кале не было примесей мочи, нельзя использовать дополнительные вспомогательные средства для испражнения (клизма). Собирать материал нужно в день сдачи, хватит 1/3 объема контейнера. Данный метод диагностики имеет следующие преимущества:

1. Анализ способен указывать на ДНК паразита, другие же тесты могут определять только остатки их жизнедеятельности.
2. Высокая точность, будет установлен возбудитель.
3. Ультрачувствительный анализ, который способен выявить даже одну клетку вируса.
4. Результат исследования ПЦР будет готов через 4-5 часов.

Мочи

При необходимости для проведения теста врач может взять для исследования мочу. Высокая точность открывает возможность работать с любой биологической жидкостью, из которой удается извлечь ДНК вируса. Чтобы сдать анализ мочи ПЦР, нужно придерживаться таких ограничений перед забором материала:

• минимум за 1 день до процедуры прекратить половые контакты;
• за 3 недели до сдачи должно быть окончено любое антибактериальное лечение, потому что медикаменты смажут картину;
• сдавать анализ нужно натощак (жидкость тоже запрещена);
• брать нужно первую утреннюю порцию материала.

Российские тест-системы по методу ПЦР

В России на сегодняшний день зарегистрировано достаточно ПЦР тест-систем для исследований на коронавирусную инфекцию. Все они максимально чувствительны к коронавирусу (до 95%). Недостоверность данных обусловлена несоблюдением общих правил подготовки, забора, транспортировки, проведения теста. Это редкость. Мы перечислим зарегистрированные на территории РФ тест-системы, все остальное – от лукавого. Подчеркнем, что в Сети нет легальных систем, которые гарантируют достоверный результат.

• «Вектор»Роспотребнадзора;
• «ЦСП» МЗ РФ;
• ЦНИИ эпидемиологииРоспотребнадзора;
• «Вектор-Бест»;
• «Литех»;
• «ДНК-Технология ТС»;
• «48 ЦНИИ»Минобороны России;
• «МедипалТех»;
• «Система-БиоТех»;
• «АВИВИР»;
• «Генотек».

Основные методы лабораторной диагностики

Учитывая длительное бессимптомное течение, результаты обычного анализа крови и мочи могут быть без каких-либо отклонений. Поэтому для выявления вируса гепатита Ц используют серологические (ИФА) и молекулярные (ПЦР) методы лабораторной диагностики. Для этого сдают кровь из вены в частной лаборатории либо поликлинике по месту жительства. Срок получения результатов – до 5 дней.

Подробнее о диагностике заболевания

Инкубационный период  Вирус  Расшифровка количественного анализа  Маркеры  Anti-HCV  Вирусная нагрузка  Экспресс-тест  Ложноположительный анализ  Антитела  ПЦР  Anti-HCV-total

Когда можно обнаружить HCV в крови?

Основные методы диагностики патологии можно разделить на две группы. Молекулярные исследования направлены на обнаружение частиц вируса. Помимо наличия РНК возбудителя гепатита С, такой анализ показывает его количественное содержание и точный генотип. Серологическое исследование (ИФА) «реагирует» на выработку иммуноглобулинов, синтезируемых при попадании вируса в кровь человека. 

Уровень РНК, достаточный для лабораторного определения, достигается через 10–16 дней после инфицирования (если проводить диагностику современными высокочувствительными технологиями). Количественно вирусную РНК можно определить позже, через 4–6 недель после заражения. Тогда же целесообразно проводить и генотипирование. Синтез антител начинается сразу же, при первом контакте вируса с кровью человека. Но лабораторным путем при помощи анализа ИФА их можно обнаружить только через 3–4 недели. 

Возможность выявления вируса на ранних стадиях зависит от индивидуальных особенностей больного – сроков выработки антител и активности процессов репликации вируса. 

Какие анализы сдают при подозрении на гепатит С:

• биохимия крови, печеночные пробы (отклонения от нормы могут лишь косвенно указывать на наличие гепатита С);
• ИФА;
• ПЦР.

Грамотное поэтапное полное обследование способствует исключению неопределенных результатов, дает максимально точную картину здоровья пациента в целом и позволяет врачу назначить правильное лечение. 

Недостатки анализа ПЦР

Хоть этот способ и универсален и высокоточен, но его использование повсеместно просто невозможно.

Потому что для его проведения нужно очень дорогое оборудование, и не во всех государственных поликлиниках и больницах есть средства, для его приобретения.

А сдать такой анализ в платных клиниках есть возможность далеко не у всех пациентов.

Список конкретных недостатков довольно короткий:

• этот анализ имеет высокую стоимость;
• быстрые мутации и изменения микобактерий сводят эффективность ПЦР-анализа к нулю, потому что происходит изменение строения цепочек ДНК бактерий;
• необходимо правильно выбрать материал, который будет подвержен исследованию, в противном случае оно не будет эффективно. Если при туберкулёзе лёгких взять на исследование мочу, то ПЦР-тест не выявит присутствия микобактерий.

Исследования ПЦР – новые методики, которые уже очень хорошо зарекомендовали себя. Самым большим плюсом этих исследований стала универсальность.

Для проведения этого анализа можно использовать любую среду: спинномозговую жидкость, кровь, слюну, мочу, мокроту и т.д.

При современной оснащённости лабораторий выявить микобактерии можно разными способами на ранних стадиях развития и у взрослых, и у детей.

Но несмотря на все профилактические меры и рекомендации, которые проводятся нашими медиками, заболеваемость растёт год от года.

Расшифровывая результаты исследований, врачи делают заключение, что каждый раз патология приобретает всё более тяжелые и осложнённые формы.

За всё происходящее вина лежит, в первую очередь на самих больных. Сделайте регулярными профилактические посещения врача.

Сегодняшние методы диагностики различных заболеваний в значительной степени облегчают лечение и снижают риск осложнений.

Какие материалы исследуются при данном анализе?

Биоматериалом для ПЦР-исследования на 12 инфекций, в котором можно определить чужеродную ДНК болезнетворной бактерии или РНК и ДНК вируса могут служить разные биологические жидкости и среды человека:

1. Кровь, сыворотка, плазма. Используются для ПЦР вирусов гепатитов B, D, C, G, герпеса, ВИЧ, ЦМВ, исследования человеческих генов.
2. Моча. Может применяться при инфекционных поражениях женских мочевыделительных органов и мочеполовых каналов мужчин (применение в качестве биоматериала мочи может заменить эпителиальный соскоб).
3. Мокрота. Ее применяют для диагностики туберкулеза и в некоторых случаях для диагностики респираторных типов микоплазмоза и хламидиоза. Мокроту в количестве 20 миллилитров собирают в одноразовый стерильный флакон.
4. Иные биологические жидкости. Плевральная, околоплодная, спинномозговая, суставная жидкости, сок простаты, слюна, бронхоальвеолярный лаваж — забираются исключительно при наличии строгих показаний.
5. Биоптаты. Чаще всего применяются биоптаты двенадцатиперстной кишки и желудка для определения наличия хеликобактерной инфекции.
6. Эпителиальные соскобы со слизистых покровов. Обычно они применяются для диагностики патологий, передающихся половым путем, таких как, например, гонорея, микоплазмоз, хламидиоз, уреаплазмоз, гарднереллез, трихомониаз, герпетическая и прочие инфекции, поражающие слизистую оболочку.

Чтобы сдать анализ ПЦР на 12 инфекций, нужно предварительно подготовиться.

Стоимость анализа в разных центрах

Ниже можно ознакомиться с информацией о том, какие приблизительные цены на ПЦР мочи в медицинских лабораториях. Для сравнения представляем три популярных учреждения.

Из вышеописанного можно сделать вывод, что стоимость на анализ не превышает 400 рублей. Такая сумма не может остановить больного при необходимости подтверждения диагноза.

Имейте в виду! Иногда в клиниках присутствуют акции и скидки. Следить за ними можно на сайтах лабораторий, узнать в телефонном режиме или не ресепшене в самом офисе.

Как сдавать анализы

Как мы уже говорили, врач может попросить сдать для исследования различный биологический материал, поэтому подготовка к процедуре зависит от того, на что именно вы проверяетесь.

Сдача слюны, мочи, спермы

Если специалист берет на анализ слюну, то перед процедурой нельзя есть и принимать лекарства как минимум 4 часа. Перед тем, как сдать анализ, наберите в рот кипяченой воды, чтобы прополоскать его.

Если доктор попросил сдать мочу, то нужно брать только утреннюю. Перед тем, как собрать мочу на анализ, необходимо тщательно подмыться. Чтобы материал был чистым, без посторонних примесей, женщинам во влагалище лучше вставить тампон, а мужчинам постараться оттянуть кожную складку. В контейнере должно быть не менее 50-60 мл мочи.

Если берут на анализ сперму у мужчин, то перед ее сдачей он должен воздерживаться от половых контактов как минимум 3 дня. Также в это время не стоит посещать сауну, принимать горячую ванну, употреблять спиртные напитки, есть острую пищу

Важно перед тем, как сдать анализ, как минимум 3 часа не ходить в туалет, т.е. воздержаться от мочеиспускания.

  Если врач попросил сдать кровь, то это делается утром, натощак. Перед этим не стоит увлекаться жирной пищей и пить алкогольные напитки.

Мазок у женщин

Чаще всего врачи все же просят сдать мазок на ПЦР, чтобы определить наличие половых инфекций. В разных лабораториях может быть свой список исследуемых заболеваний. Что именно нужно проверять в каждом конкретном случае, решает врач.

В каких случаях у женщин берут мазок на половые инфекции? Анализ назначается в том случае, если есть риск заражения инфекциями, передающимися половым путем:

• Проводят обследования женщин, у которых в течение года был не один половой партнер, а несколько, или же появился новый партнер.
• Берут анализ и у женщин, у которых до этого уже была выявлена инфекция, передающаяся половым путем.
• Обязательно проводят обследование беременных женщин. Даже если болезнь не дает о себе знать, наличие инфекции в организме угрожает здоровью плода.

Не всегда ЗППП проявляют себя, иногда у зараженных женщин нет ярко выраженных симптомов, но они больны, поэтому могут заразить партнера, заработать себе бесплодие, воспаление органов малого таза и другие осложнения.

  Как правильно это делать? У женщин берут мазок при помощи специальной щеточки, которая не впитывает слизь и не повреждает слизистую оболочку влагалища, мочевого канала или шейки матки. Как подготовиться к процедуре?

• После последнего полового акта должно пройти не менее 36 часов.
• Если вы лечились антибиотиками, сначала надо завершить курс лечения, после чего подождать не менее 3 недель до сдачи анализа.
• Нельзя сдавать мазок, если у женщин менструация или маточное кровотечение.
• Перед тем, как сдавать мазок, нельзя подмываться, тем более, использовать антибактериальное мыло.
• Нельзя мочиться перед анализом, как минимум 3 часа. Правило действует и для женщин, и для мужчин.
• Если у женщин еще не закончилось лечение, они принимает лекарства, вставляет вагинальные свечи, об этом надо сказать врачу, сдавать мазок тогда нельзя.

Мазок у мужчин

У мужчин берут мазок из мочеиспускательного канала. Как это происходит? Для забора материала у мужчин используется специальный зонд, который нужно ввести в него на глубину 3 см. Это не очень приятная процедура, может быть больно, появиться жжение, чувство дискомфорта. Чтобы уменьшить неприятные ощущения у мужчин, перед процедурой проводят массаж мочеиспускательного канала.

Подготовка к процедуре:

• Несколько дней перед тем, как сдать анализ (1-3 дня) нельзя заниматься сексом.
• Мазок обычно у мужчин берут утром. Перед этим не нужно проводить гигиену половых органов, это лучше сделать с вечера.
• За 3 часа до того, как идти к врачу, нельзя мочиться.
• Как и у женщин, у мужчин под запретом любые лекарственные препараты.

ПРЦ-исследование, что это такое?

Анализ на ПЦР заключается в копировании ДНК и РНК возбудителя в лабораторных условиях. Так как основным хранилищем генетической информации является ДНК (дезоксирибонуклеиновая кислота), образованная 2 нитями, соединенными нуклеотидами, именно при множественном копировании (синтезе) этой кислоты можно установить наличие патогенного организма, если речь идет о бактерии.

Бактерии имеют свою собственную оболочку, защищающую их от внешней среды, которая нередко является агрессивной по отношению к последним. У вирусов же нет собственной оболочки (у некоторых представителей имеется нечто похожее на оболочку), а информацию в себе несет не ДНК, а РНК (рибонуклеиновые кислоты).

РНК устроены таким образом, что они встраиваются в цепи ДНК организма-переносчика и меняют их, позволяя проникать в клетки и жить за счет организма. Грубо говоря, бактерии и вирусы оставляют «отпечатки» своими ДНК и РНК, которые и выявляет анализ ПЦР. Эти «отпечатки», как и отпечатки пальцев, являются уникальными для каждого возбудителя. Поэтому ПЦР позволяет выявить заболевание на любых этапах, даже если развитие патогена происходит бессимптомно.

До широкого внедрения ПЦР в гинекологии и урологии на ИППП широко использовались методы:

• микроскопия — окрашенные и неокрашенные препараты исследуются через микроскоп. Метод очень завязан на опытности лаборанта. Таким методом хорошо выявляются бактерии, имеющие большой размер (гарднереллы, кандиды, трихомонады, гонококки);
• бактериология — метод заключается в выращивании возбудителей инфекции на питательном агаре, идентификации возбудителя и определения чувствительности его к антибиотикам. Долгое время считался «золотым стандартом». К минусам относят необходимость быстрой доставке материала в КДЛ (клинико-диагностическая лаборатория), сроки выращивания и выяснения чувствительности к группам антибактериальных препаратов (как правило, 5-7 суток);
• иммуноферментный анализ — Определение антител организма, возникающих в ответ на внедрение антигена возбудителем инфекции. Из плюсов стоит отметить возможность определения стадии заболевания (острая стадия сопровождается наличием IgG в сыворотке крови, хроническая – IgM.) К минусам относится невозможность определения у людей с ослабленным иммунитетом, а также специфичность ИФА. Другими словами, при наличии только результата иммуноферментного анализа, невозможно было выставить диагноз, а можно было только определить, что организм борется с какой-либо инфекцией.

Преимущества метода ПЦР диагностики как метода диагностики инфекционных заболеваний

Прямое определение наличия возбудителей

Многие традиционные методы диагностики, например иммуноферментный анализ, выявляют белки-маркеры, являющиеся продуктами жизнедеятельности инфекционных агентов, что дает лишь опосредованное свидетельство наличия инфекции. Выявление специфического участка ДНК возбудителя методом ПЦР дает прямое указание на присутствие возбудителя инфекции.

Высокая специфичность

Высокая специфичность метода ПЦР обусловлена тем, что в исследуемом материале выявляется уникальный, характерный только для данного возбудителя фрагмент ДНК. Специфичность задается нуклеотидной последовательностью праймеров, что исключает возможность получения ложных результатов, в отличие от иммунологических методов анализа, где нередки ошибки в связи с перекрестно-реагирующими антигенами.

Высокая чувствительность

Метод ПЦР позволяет выявлять даже единичные клетки бактерий или вирусов. ПЦР анализ обнаруживает наличие возбудителей инфекционных заболеваний в тех случаях, когда другими методами (иммунологическими, бактериологическими, микроскопическими) это сделать невозможно. Чувствительность ПЦР анализа составляет 10-100 клеток в пробе (чувствительность иммунологических и микроскопических тестов — 103-105 клеток).

Универсальность процедуры выявления различных возбудителей

Материалом для исследования методом ПЦР служит ДНК возбудителя. Метод основан на выявлении фрагмента ДНК или РНК, являющегося специфичным для конкретного организма. Сходство химического состава всех нуклеиновых кислот позволяет применять унифицированные методы проведения лабораторных исследований. Это дает возможность диагностировать несколько возбудителей из одной биопробы.

Высокая скорость получения результата анализа

Для проведения ПЦР анализа не требуется выделение и выращивание культуры возбудителя, что занимает большое количество времени. Унифицированный метод обработки биоматериала и детекции продуктов реакции и автоматизация процесса амплификации дают возможность провести полный анализ за 4-5 часов.

Возможность диагностики не только острых, но и латентных инфекций

Особенно эффективен метод ПЦР для диагностики трудно культивируемых, некультивируемых и персистирующих форм микроорганизмов, с которыми часто приходится сталкиваться при латентных и хронических инфекциях, поскольку этот метод позволяет избежать сложностей, связанных с выращиванием таких микроорганизмов в лабораторных условиях. Применение ПЦР диагностики также очень эффективно в отношении возбудителей с высокой антигенной изменчивостью и внутриклеточных паразитов.

В каких случаях нужна диагностика ПЦР

Сделать анализ ПЦР часто направляют больных, в случаях затруднительной постановки диагноза. Обычно это тест проводят комплексно вместе с другими исследованиями.

Это делается в случаях подозрения первичного инфицирования, а другие способы не позволяют выявить заболевание.

Или же ПЦР-диагностику проводят в случаях, если больной самостоятельно не может прибыть в лабораторию, тогда материалы для проведения анализа доставляют его родственники.

Это может быть моча, мокрота, слюна или посев. Посевы на дому могут сделать только медицинские работники, имеющие сертификат на выполнение таких действий.

Именно ПЦР поможет выявить заболевания туберкулёзом у детей. Это исследование совершенно безвредно и имеет более высокую точность, в сравнении с пробой Манту.

Также проведение этого анализа показано и беременным женщинам, которым нельзя делать флюорографию.

Используют ПЦР-анализ и пред проведением операций, потому что такой способ более быстрый и точный.

Если возникли сомнения в результатах рентгена лёгких и пробы Манту, такую диагностику можно пройти самостоятельно.

При заболевании туберкулёзом проводится масса различных анализов, которые назначает врач, чтобы как можно точнее поставить диагноз. Часто приходится проходить целый комплекс анализов.

Иногда в расшифровке ИФА могут быть ложноположительные результаты, из-за содержания в крови антител после приёма курса лечения.

Также недостоверными могут оказаться и другие исследования. На данный момент ПЦР — самый точный из способов диагностики.